经方茵陈蒿汤的化学研究(2)

<0.05)。SOD活性及GSH含量均随着模型进展显著降低(p<0.05),茵陈蒿汤、黄芪汤和一贯煎显著升高SOD活性(p<0.05/0.01);茵陈蒿汤和黄芪汤显著升高GSH含量(p<0.05/0.01)。3.肝组织CD68和TNF-α蛋白表达均在2周最高,4周有一定程度的降低,与4周模型相比,茵陈蒿汤汤和下瘀血汤显著降低CD68蛋白表达(p<0.01),而黄芪汤却提高其表达(p<0.01);茵陈蒿汤、小柴胡汤和黄芪汤均显著降低TNF-α蛋白表达,以茵陈蒿汤最为显著。肝组织α-SMA和TGF-β随着模型进展而逐渐升高：茵陈蒿汤、小柴胡汤和黄芪汤均显著降低α-SMA和TGF-β蛋白表达,以茵陈蒿汤和黄芪汤效果最好。HGF-α蛋白表达,模型大鼠随着造模时间的进展而显著降低,在5首古典方剂中,黄芪汤和茵陈蒿汤显著提高其蛋白表达(p<0.01);以黄芪汤最为显著(p<0.01)。4.正常组表达一定水平的CytochromeC、Cleaved-caspase-9和PCNA,三者均在造模2周到达高峰；与2周模型组相比,DMN造模4周,这些蛋白表达显著下降(p<0.01);与4周模型组相比,茵陈蒿汤可以显著降低CytochromeC、Cleaved-caspase-9和PCNA蛋白表达(p<0.01)。与此相反,Bcl-xL蛋白表达在2周模型组最低,4周模型组有一定程度的升高,与4周模型相比,茵陈蒿汤可以显著升高Bcl-xL蛋白表达(p<0.01);Pro-caspase-12随着模型进展逐步升高,Cleaved-caspase-12活性片段4周显著升高(p<0.01);与4周相比,茵陈蒿汤可以显著降低Pro/Cleaved-caspase-12蛋白表达(p<0.05/0.01)。5.肝组织CD68免疫印迹、real-timePCR和免疫组化/免疫荧光均证明均已证明CD68在2周模型组表达最高,4周模型组有一定程度降低,与4周模型组相比,茵陈蒿汤可以显著降低CD68蛋白表达(p<0.01);肝组织CD163免疫印迹、Real-timePCR和免疫组化/免疫荧光均证明,CD163随着模型进展而逐步降低。与4周模型组相比,茵陈蒿汤显著升高CD163蛋白表达(p<0.01);TNF-αmRNA和蛋白表达结果表明,DMN造模2周,TNF-αmRNA即达到高峰,与2周模型相比,DMN造模4周TNF-αmRNA显著降低(p<0.01),茵陈蒿汤显著降低其表达。IFN-γmRNA在DMN造模2周即达到高峰,为正常组的5.08倍,DMN造模4周,水平降至正倍；与4周模型组相比,茵陈蒿汤显著升高IFN-γ,mRNA表达(p<0.01)染色发现：凋亡在正常组很低,DMN造模2周,凋亡细胞增至最多,DMN造模4周,凋亡细胞明显减少,与4周模型相比,茵陈蒿汤明显降低凋亡细胞。利用激光共聚焦发现：肝细胞凋亡可能并不是肝脏内主要凋亡细胞,因为用HepatocyteParaffin(Heppar)和TUNEL共定位结果发现Heppar和TUNEL双阳性细胞只占TUNEL其中一小部分。CD68和TUNEL共定位有大量的双阳性细胞,提示ED1KCs可能是主要的凋亡细胞。CD163/α-SMA与TUNEL共定位结果发现：没有明显的双阳性细胞发现,提示ED2KCs和HSCs并不是肝脏主要凋亡细胞。7.肝组织α-SMA/Col-(α)1mRNA表达随着模型进展逐渐升高,与4周模型组相比,茵陈蒿汤显著降低α-SMA/Col-1(α)1mRNA表达(p<0.05/0.01)。TGF-β1免疫组化表明,正常表达较低,随着模型进展而逐步升高,与4周模型组相比,茵陈蒿汤显著降低TGF-β1蛋白表达；和TGF-β蛋白表达趋势相同,MMP-13/14蛋白表达同样随着模型的进展不断升高,茵陈蒿汤显著降低MMP-14蛋白表达(p<0.01)而显著升高MMP-13的表达(p<0.01)。TGF-β1ReceptormRNA和蛋白印迹表明,基因和蛋白表达趋势并不完全一致。Real-timePCR结果表明：在DMN造模2周和4周有升高趋势,但无显著性差异,与4周模型组相比,茵陈蒿汤显著降低TGF-β1ReceptormRNA表达(p<0.01)。TGF-β1Receptor免疫印迹结果发现：与正常相比,DMN造模2周,蛋白表达有降低趋势,造模4周显著升高(p<0.01);与4周模型组相比,茵陈蒿汤显著降低TGF-β1Receptor蛋白表达(p<0.01)。PDGF-BB和PDGF-Breceptor免疫印迹和mRNA的结果表明：2者的表达趋势是一致的。随着造模时间的延长而逐步升高；茵陈蒿汤显著降低它们的表达(p<0.05)。结论：1.清热利湿的茵陈蒿汤显著抑制DMN所诱导的肝纤维化向肝硬化的发展,其他不同功效方剂：益气的黄芪汤、养阴的一贯煎、祛瘀的下瘀血汤及和解少阳清热益气的小柴胡汤均无此效应。提示DMN造模3-4周这一肝纤维化向肝硬化的发展阶段具备清热利湿茵陈蒿汤效应的方证病理学基大鼠慢性肝损伤模型3-4周这一阶段以CD68阳性KCs表达的显著增加以及过氧化损伤为重点的肝组织炎性反应是DMN大鼠慢性肝损伤的重要病理特征,是茵陈蒿汤发挥效应的关键病理生物学基础。3.黄芪汤可显著抑制该模型阶段增高的TGF-β1、提高HGF以及抑制HSCs的活化,并具有一定的抗氧化效用,但同时促进CD68阳性KCs表达的增加。而后者可能是黄芪汤方证不对应未能呈现整体综合效应的病理生物学基础之一。3.学位论文丁赛丹不同功效经典方剂干预二甲基亚硝胺大鼠肝硬化的肝组织蛋白质组效应基础研究2009目的:基于课题组已获得的研究结果，二甲基亚硝胺大鼠腹腔注射造模2周时，形成典型的肝纤维化，持续造模至4周末有75％大鼠已形成典型的肝硬化，在造模2周后，即第3周开始给于不同功效的古典方剂至4周末，结果表明。茵陈蒿汤可显著抑制大鼠硬化的形成，黄芪汤具有一定效应，而一贯煎、下瘀血汤及小柴胡汤则无明显作用。本文在此基础上采用蛋白质组学技术，探讨不同功效方剂干预二甲基亚硝胺肝硬化大鼠肝组织的蛋白质组效应基础。

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